豬藍耳病又名豬流行性流產(chǎn)和呼吸綜合征,該病病原體為Lelysted病毒,呈卵形、有囊泡、直徑在40-60 nm之間,表面有約5 nm大小凸起,基因組為單股正鏈RNA病毒,該病毒PRRSV基因組具有較強的變異性,傳染性強具有地方流行性,我國將其列為二類傳染病,在防治該病的過程中首先需要快速診斷和檢測藍耳病病毒,在檢測藍耳病病毒時需要統(tǒng)yi的標準物質(zhì)。
實驗設備
冷凍干燥機FDU-1200
冷阱溫度-45 ℃
除濕量1 L
采用便捷式設計、可置于實驗桌上,操作簡單可分別采用手動和自動運行模式,方便科研人員開展大量的實驗工作。
實驗過程
步
將滅活后的病毒液制備藍耳病病毒核酸檢測標準物質(zhì),將純化后的病毒進行無菌檢測、外源性病毒檢測。
第二步
將凍干保護劑與藍耳病病毒液混合搖勻后,移液分裝至10支容量為3 mL的具十字橡膠塞的無菌瓶中(十字塞的十字部分插入瓶中,塞冒懸于瓶口),每支1 mL試樣。
第三步
將10支分裝好的試樣瓶置于-80 ℃的預凍30 min后取出,預凍后樣品瓶置于冷阱溫度已達-45 ℃的凍干倉中,運行真空泵開始凍干,一直到樣品質(zhì)量不發(fā)生變化時凍干結(jié)束并在真空狀態(tài)下壓蓋密封十字橡膠塞,得到凍干后的樣品。
第四步
采用實時熒光定量RT-PCR方法檢測藍耳病病毒標準物質(zhì)的均勻性、穩(wěn)定性,得到藍耳病病毒檢測標準物質(zhì)也為該病毒定性和定量檢測提供標準物質(zhì)。